菌落總數(shù)測試片（凝膠法）
執(zhí)行標準：食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定（GB 4789.2）
產(chǎn)品參數(shù):
詳細介紹:
1 原理及適用范圍
菌落總數(shù)是指食品樣品經(jīng)過處理，在一定條件下培養(yǎng)后所得1mL(g)檢樣，是最常見的微生物檢測項目。菌落總數(shù)測試片是一種預(yù)先制備好的一次性培養(yǎng)基產(chǎn)品，含有標準的營養(yǎng)培養(yǎng)基，冷水可溶性的吸水凝膠和脫氫酶指示劑氯化三苯基四氮唑（TTC），菌落在測試片上呈紅色，其優(yōu)點在于縮短計數(shù)時間和便于計數(shù)。本產(chǎn)品適合于各類食品及食品原料中菌落總數(shù)的測定。
執(zhí)行標準：食品安全國家標準 食品微生物學(xué)檢驗 菌落總數(shù)測定（GB 4789.2）。
新型凝膠型菌落總數(shù)測試片的特點：
1.菌落規(guī)則
類似瓊脂的凝膠，菌落生長三維分布，更好觀察，易于計數(shù)。
2.無液化現(xiàn)象
菌落總數(shù)檢測片使用新的凝膠技術(shù)，芽孢桿菌等不會造成液化擴散現(xiàn)象，更易于觀察計數(shù)
3.不過度擴散
新的抑制技術(shù)，控制霉菌菌絲過度擴散，菌落更集中。
4.準確可靠
配方經(jīng)過多次調(diào)整，測試片與國標法對比，實驗結(jié)果符合率高。
5.簡單易用
自擴散輕便設(shè)計，操作簡單。 即用型無菌產(chǎn)品，免去制備過程，節(jié)省時間。
2 操作方法
2.1 樣品處理：取樣品 25 mL（g）放入含有225 mL滅菌磷酸緩沖液稀釋液（或生理鹽水）的取樣罐或均質(zhì)杯內(nèi)，制成1:10的樣品勻液，必要時用1mol/LNaOH或1mol/L HCl溶液調(diào)節(jié)樣品勻液pH至6.6~7.2。用1mL滅菌吸管吸取1:10樣品勻液1mL，注入含有9mL稀釋液的試管內(nèi)，振搖后成為1:100的樣品勻液，以此類推，做出1:1000等稀釋度的樣品勻液，每次換一支吸管。
2.2 接種：一般食品選2~3個稀釋度進行檢測，含菌量少的液體樣品（如飲用純水和礦泉水等）可直接吸取原液進行檢測。取菌落總數(shù)測試片置于平坦實驗臺面，翻開測試片蓋膜，用無菌吸管吸取1mL樣品勻液均勻地滴加到紙片上，等待紙片完全吸收液體，慢慢放下蓋膜，每個稀釋度接種兩片。同時做一片空白陰性對照。
2.3 培養(yǎng)： 將測試片疊放在一起，水平置于恒溫培養(yǎng)箱內(nèi)，堆疊片數(shù)不超過10片。一般食品培養(yǎng)溫度為36℃±1℃，培養(yǎng)15~24h；水產(chǎn)品培養(yǎng)溫度為30℃±1℃，培養(yǎng)48h。
3 結(jié)果判讀
細菌在測試片上生長后會顯示紅色斑點，選擇菌落數(shù)適中（30 CFU~300 CFU個）的測試片進行計數(shù)，乘以稀釋倍數(shù)后即為每毫升（克）樣品中所含的細菌菌落總數(shù)。
4 計數(shù)原則及報告方式
4.1 若只有一個稀釋度紙片上的菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)，計算兩個紙片菌落數(shù)的平均值，再將平均值乘以相應(yīng)稀釋倍數(shù)，作為每毫升(或克)樣品中菌落總數(shù)結(jié)果。
4.2 若有兩個連續(xù)稀釋度的紙片菌落數(shù)在適宜計數(shù)范圍內(nèi)時，按式(1)計算:
·········（1）
式中：
N——樣品中菌落數(shù)；
∑C——測試片上(含適宜范圍菌落數(shù)的測試片)菌落數(shù)之和；
n1——第一個適宜稀釋度測試片數(shù)；
n2——第二個適宜稀釋度測試片數(shù)；
d——稀釋因子(第一稀釋度)。
示例：
稀釋度 | 1：100（第一稀釋度） | 1：1000（第二稀釋度） |
菌落數(shù)（CFU） | 232，244 | 33，35 |
上述數(shù)據(jù)經(jīng)“四舍五入”后，表示25000或2.5×104。
4.3 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均大于300 CFU，則對稀釋度最高的測試片進行計數(shù)，其他測試片可記錄為多不可計，結(jié)果按平均菌落數(shù)乘以最高稀釋倍數(shù)計算。
4.4 若所有的稀釋度菌落總數(shù)均小于30 CFU，則應(yīng)按稀釋度最低的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
4.5 若所有的稀釋度（包括液體樣品原液）均無菌落生長，則以小于1乘以最低稀釋倍數(shù)計算。
4.6 若所有稀釋度的平均菌落數(shù)均不在30 CFU~300 CFU之間，其中一部分小于30 CFU或大于300 CFU，則以最接近30 CFU或300 CFU的平均菌落數(shù)乘以稀釋倍數(shù)計算。
4.7 菌落總數(shù)的報告
4.7.1 菌落數(shù)在100 CFU以內(nèi)時，按“四舍五入”原則修約，以整數(shù)報告。
4.7.2 大于或等于100 CFU時，第三位數(shù)字采用“四舍五入”原則修約后，取前兩位數(shù)字，后面的0代替位數(shù)，也可用10的指數(shù)形式來表示，按“四舍五入”原則修約后，采用兩位有效數(shù)字。
4.7.3 若測試片上一片紅色無法計數(shù)時，則報告多不可計。
4.7.4 若空白對照上有菌落生長，則此次檢測結(jié)果無效。
4.7.5稱重取樣以CFU/g為單位報告，體積取樣以CFU/mL為單位報告。
5 附加說明
5.1菌落總數(shù)測試片檢測結(jié)果與傳統(tǒng)平板計數(shù)瓊脂平板法符合率可達80％以上，山東省疾病預(yù)防控制中心進行的驗證試驗表明，24h計數(shù)測試片上菌落數(shù)為平板菌落數(shù)的87％。
5.2磷酸緩沖液稀釋液的配制與滅菌：貯存液：稱取34.0g的磷酸二氫鉀溶于500mL蒸餾水中，用大約175mL的1mol/L氫氧化鈉溶液調(diào)節(jié)pH至7.2，用蒸餾水稀釋至1000mL后貯存于冰箱。稀釋液：取貯存液1.25mL，用蒸餾水稀釋至1000mL，分裝于適宜容器中，121℃高壓滅菌15分鐘，或者放入消毒碗柜中消毒。
5.3生理鹽水的配制與滅菌：取8.5g分析純氯化鈉（NaCl）溶解到1000mL蒸餾水或純凈水中，先煮開后進行分裝，取9mL加入到10mL潔凈試管中，蓋上硅橡膠塞或棉紗塞，放入消毒柜中消毒。
